Пцр на туберкулез: диагностика, анализ крови, мочи, мокроты и что это такое?

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

Суть метода

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

• Кровь.
• Слюна.
• Мокрота.
• Выделения из половых органов.
• Смывная жидкость бронхов.
• Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-исследование туберкулеза

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

Показания для проведения ПЦР-исследования туберкулеза

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

• Длительный контакт с больным туберкулезом.
• Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
• Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
• Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
• ВИЧ-инфекция.
• Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
• Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

• Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
• Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
• Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
• Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
• Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
• Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Требования к ПЦР-лаборатории

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

• Зона приемки и сортировки проб.
• Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
• Зона проведения реакционных проб.
• Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

Плюсы ПЦР-диагностики

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

• Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
• Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
• ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
• С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
• Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
• Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
• Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
• ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
• Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

• Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
• Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
• При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
• Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
• Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

• Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).
• Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).
• Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.
• В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

Источник: http://tuberculosis.su/pcr-diagnostika.html

Анализ мокроты на туберкулез: метод ПЦР, как собрать мокроту, цена

Свернуть

Для выявления палочки Коха в организме человека, используют разные диагностические методы. Благодаря ним патологию можно обнаружить даже на начальном этапе, что увеличивает шансы больного на выздоровление. Анализ мокроты на туберкулез – это методика, которая наиболее ценится, так является достаточно эффективной. Что она собой представляет и сколько стоит такой анализ?

Что такое анализ мокроты методом ПЦР?

ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Данный способ эффективен по отношению к инфекционным болезням. Чтобы установить четкий диагноз не нужно собирать большое количество биоматериала и ждать много времени, как при бак-посеве мокроты.

В основе методики лежит получение ДНК частиц микроорганизма. Далее молекулярно-генетическое исследование определит, к какому типу микроорганизмов стоит отнести имеющийся материал. В пробирочных условиях за несколько часов специалист синтезирует молекулы бактерий и делает соответствующие выводы.

Эффективность

Анализ мокроты на микобактерии туберкулеза эффективен тогда, когда палочка Коха поразила органы дыхания. В таком случае без труда можно выявить болезнь, даже в первые часы инфицирования.

Но, анализ мокроты не покажет достоверного результата, если присутствует туберкулез:

• костей;
• головного, спинного мозга;
• нервной системы;
• суставов и пр.

Определить вид заболевания сможет фтизиатр, учитывая присутствующую симптоматику и опираясь на полученные результаты общих и иных анализов.

Также нецелесообразен такой метод исследования в том случае, когда нужно провести контрольный анализ после терапевтического лечения заболевания. Результат будет положительным, так как в организме в любом случае еще имеются живые или мертвые МБК. Тут лучше отдать предпочтение другой диагностической процедуре.

Противопоказания к методу

Как таковых противопоказаний для исследования мокроты на туберкулез при помощи ПЦР нет. Есть ограничения. Как уже говорилось выше, нет надобности в его проведении после лечения туберкулеза. Полученные результаты не принесут пользы. Тут желательно прибегнуть к иной диагностике.

Кроме этого, нет никаких иных препятствия для проведения этой диагностики. Исследовать мокроту можно в любой возрастной категории и при любых сопутствующих заболеваниях. Даже если нет обильного выхода мокроты, анализ можно сделать путем забора слизи с помощью бронхоскопии.

Преимущества

У рассматриваемого метода масса плюсов, к ним относится:

1. Высокая специфичность и чувствительность. Выявляется только возбудитель туберкулеза. Ложного ответа быть не может, если учтены все нюансы проведения процедуры. Микобактерии обнаруживаются даже тогда, когда их минимальное количество. Даже если в собранном материале 10 патологических клеток, инфекция будет выявлена.
2. Быстрота получения ответа. Сколько делается анализ? Уже через 3-5 часов можно получить результат. Тут не нужно делать посев мокроты на туберкулез, и это сужает сроки.
3. Выявить можно как скрытую инфекцию, так и ту, которая находится в острой форме.
4. Нет абсолютных противопоказаний. Это дает возможность проводить процедуру всем без исключения (даже маленьким детям) и особенно тогда, когда другие методы неразрешены.
5. При помощи ПЦР-диагностики изучается различный биоматериал (урина, кал, кровь, слюна, спинномозговая жидкость и др.).
6. Метод выявляет туберкулез и на ранних стадиях, в первые часы после заражения.

Недостатки

Помимо положительных сторон, есть и отрицательные. Это:

1. Анализ на ПЦР – дорогое «удовольствие». Кроме этого, оборудование, необходимое для его проведения имеется не в каждом медицинском центре. В поликлиниках оно присутствует редко, так как его стоимость также велика. Если говорить о частных клиниках, то да, найти такой вид диагностики можно. Позволить его себе, к сожалению, может не каждый.
2. Показывает ложноположительный результат у тех людей, которые недавно прошли курс противотуберкулезного лечения.
3. Если МБК мутировали, то метод может также дать ложные результаты.
4. Если материал собран неправильно, или специалист, который проводит исследование, имеет недостаточный квалификационный уровень, то также возможен сбой. В некоторых случаях повторять процедуру придется несколько раз и каждый раз оплата повторяется.

Подготовка к анализу

Чтобы материал был качественным, его нужно собрать правильно и подготовиться к этому как следует.

Существуют определенные правила сбора мокроты на туберкулез. Алгоритм действий заключается в следующем:

1. Еще накануне, вечером человеку нужно выпить отхаркивающее средство (если мокрота плохо отходит). Если даже это не помогло, следует провести ингаляцию на основе лекарственного разжижающего и отхаркивающего препарата. При отсутствии мокроты пациента нацеливают на то, что будет производиться бронхоскопия. Именно во время этой процедуры и берется материал для исследования.
2. Заранее приобрести специальную емкость. Она стерильная и герметичная, поэтому ничего лишнего туда помещать нельзя, также как и открывать заранее.
3. Помещение, где будет собираться мокрота должно хорошо вентилироваться. Нужно открыть окна, двери, включить вытяжку. Еще один неплохой вариант – выйти на свежий воздух (например, на балкон или во двор).
4. Непосредственно перед процедурой нужно всех предупредить, чтобы никто не входил в комнату, где будет все происходить. Никаких лишних микрочастиц в биоматериале быть не должно – это важно.
5. Принимать пищу до сбора не рекомендуется.
6. Рот и глотка полощутся.
7. Слюна выплевывается. Ее в емкость должно попасть минимальное количество.
8. Путем откашливания человек выводит мокроту наружу и сплевывает ее в подготовленный контейнер. После окончания процедуры нужно плотно закрыть крышку и отвести образец в лабораторию.

Как правильно собрать мокроту должен рассказать врач. Если больной не решается сделать это самостоятельно, то на помощь приходят медработники. Во время манипуляции они надевают специальную защитную маску. Собирать мокроту будут в специальном кабинете, куда нет хода посторонним. Если прийти в клинику больной не может, то специалист приезжает к нему на дом и помогает осуществить сбор слизи.

Если делается бронхоскопия, то больному вводят в трахею прибор – бронхоскоп. Именно с его помощью и производится забор материала.

Для достоверности целесообразно сдать анализ трижды, а именно:

• в утренние часы натощак;
• после первого раза через 4-5 часов;
• через 24 часа после первого исследования и тоже до приема пищи.

Как проводится этот анализ?

Сдать анализ мокроты на туберкулез – это только часть работы. Основное впереди. Многое зависит от того, как подготовлен специалист.

Ход исследования следующий:

1. Специалист приступает к разрушению первичной структуры ДНК (денатурации). Тут имеется две цепочки. При высокой температуре они разъединяются.
2. На следующем этапе производится снижение температуры (отжиг). Это необходимо для связи нити ДНК с праймером.
3. Третий этап – элонгация. Тут синтезируются нужные молекулы.

Расшифровка результатов

Микобактерии туберкулеза в мокроте методом ПЦР могут быть обнаружены или же нет. Положительный результат основан тем, что в биоматериале имеется ДНК палочки Коха. Это говорит о том, что человек заражен. При отрицательном – 98% того, что обследуемый не является инфицированным.

По показателям можно судить о том:

• в какой фазе патология (латентной или активной);
• насколько организм поражен;
• эффективно ли выбранное лечение в конкретном случае.

Имейте в виду, что ничто не досконально. Поэтому и тут может быть ложноположительный или ложноотрицательный результат. Чтобы убедиться в его правильности, рекомендованы иные диагностические процедуры или же прохождение ПЦР дважды (трижды).

Стоимость анализа в разных центрах

Сдать мокроту на ПЦР можно в разных клиниках. Приведем примеры нескольких популярных московских центров с ценовой политикой.

Наименование медицинского центра	Адрес	Цена за анализ
Медицинская лаборатория Биотест	Москва, Куркино, Родионовская улица, 3	600 рублей
Медицинская лаборатория Дитрикс Медикал	Москва, Чертаново Южное, Кировоградская улица, 38, к. 1	810 рублей
Медицинская лаборатория Инвитро	Москва, Алексеевский, Кулаков переулок, 13	845 рублей

Кроме вышеуказанных адресов имеются и другие. Узнать о месторасположении всех лабораторий можно на их сайте. Из приведенных примеров видно, что стоимость анализа велика, но если учитывать его результативность, то это того стоит.

Вывод

ПЦР-диагностика – это один из эффективных диагностических методов, активно используемых в современной медицине. Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза может осуществляться как самостоятельно в домашних условиях, так и при помощи специалиста. Если мокрота не отходит, то делают бронхоскопию. Важна предварительная подготовка.

Правильно сдать биоматериал – это уже полдела. Мокрота при туберкулезе будет иметь в себе микобактерии, обнаружить которые при ПЦР не составит труда, даже если их там небольшое количество. Огромный плюс данного способа – это выявление заболевания в первые часы после заражения.

Использовать в диагностических целях можно как у взрослых, так и у детей.

Даже внушительная сумма не может остановить человека получить достоверную информацию касательно здоровья близкого человека или его собственного.

Источник: https://tuberkulez-info.ru/diagnostika/analizy/ptsr/analiz-mokroty-na-tuberkulez.html

Что такое ПЦР на туберкулёз и как делать тест?

ПЦР на туберкулёз назначают, когда невозможно поставить диагноз или нельзя провести иные исследования. Анализ даёт возможность выявить палочку Коха на самых ранних стадиях и своевременно начать лечение.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) на туберкулёз – это точный анализ, способный выявить палочку Коха за несколько часов. Диагностика основана на методах генной инженерии. Врачи выделяют клетку ДНК, при помощи генно-молекулярных тестов определяют тип возбудителей.

Преимущества метода

Преимущества исследования:

• позволяет выявить возбудителя на ранних стадиях, без проявления видимых симптомов;
• диагностика не имеет противопоказаний и разрешена детям;
• исследование можно проводить при взятии минимального количества материала.
• универсальность исследования биоматериалов;
• исследование эффективно при определении рецидива болезни.

Недостатки метода

Наряду с достоинствами, у ПЦР исследования имеются и недостатки.

Основные из них:

1. Исследование не везде можно сдать. Поскольку оборудование для такой диагностики дорогостоящее, его устанавливают в платных лабораториях.
2. ПЦР на туберкулёз может дать положительный ответ, если обнаружит убитые микобактерии, к примеру, после проведённого лечения.
3. Мутации возбудителей болезни значительно снижают эффективность метода ПЦР, поскольку нити ДНК неспособны последовательно синтезироваться.
4. Необходимость тщательно выбирать биоматериал для анализа.

Показания для ПЦР диагностики

Направляют на обследование по следующим показаниям:

1. Если был хотя бы единичный контакт с больным туберкулёзом и выявить заболевание с помощью стандартных анализов сложно.
2. Бывают ситуации, когда нет возможности привести человека для рентгена или других исследований. В таких случаях гораздо проще доставить мокроту.
3. Анализ назначается накануне предстоящей операции, когда необходимо определить, болен человек или нет.
4. Если у пациента сомнительный результат реакции Манту.
5. Назначают беременным и детям, чтобы избежать облучения от рентгена.

Виды анализов ПЦР на туберкулёз

Выбор биоматериала для обследования на туберкулёз должен назначаться в индивидуальном порядке.

Для диагностики ПЦР на туберкулёз могут взять анализы:

• крови;
• слюны (мазок);
• мокроты;
• мочи.

Анализ крови

Особенности анализа крови на туберкулёз:

1. Проводят в тех случаях, когда другие диагностики не подходят или противопоказаны. Например, для постановки верного диагноза требуется делать не один рентген-снимок. Для организма излишнее облучение небезопасно, поэтому взять кровь у пациента гораздо проще.
2. Также врач может дать направление на кровь при получении спорных результатов после флюорографии.

Анализ слюны

Особенности:

1. Анализ слюны менее популярен и информативен, чем другие исследования, так как туберкулёз не поражает слюнные железы. Поэтому в большинстве случаев результат будет отрицательным.
2. Метод направлен на выявление лёгочных и внелёгочных форм.
3. Если под действием реагента цвет образца не меняется, это означает, что возбудителей нет. Если все же возникает подозрение на болезнь, то проводится дополнительный комплекс анализов.

Анализ мокроты

Анализ мокроты является наиболее информативным для выявления возбудителей туберкулёза. Пробы берут несколько раз, как правило, трёх раз достаточно. Это исключает возможность ошибок при получении некачественного материала.

Если человек заражён туберкулёзом, то вместе с кашлем будет выделяться мокрота в небольших количествах. У больных в запущенной стадии заболевания слизь будет выделяться с кровянистыми вкраплениями.

Не рекомендуется брать мокроту для обследования, если у пациента подозрения на туберкулёз костей или нервной системы.

Анализ мочи

Анализ мочи – это один из способов выявления внелёгочных форм заболевания: туберкулёз почек и мочеполовой системы.

При лёгочной форме заболевания общий анализ мочи практически неинформативен, так как не наблюдается ярко выраженных патологических изменений.

Из видео вы узнаете какой врач ставит диагноз туберкулёз. Снято каналом tuberculum. ru.

Подготовка к сдаче анализа

При сдаче анализа крови ПЦР стоит придерживаться некоторых правил для получения достоверного результата:

• рекомендуется сдавать анализ натощак;
• следует исключить алкоголь накануне обследования;
• нужно закончить приём антибиотиков за 15–20 дней до анализа;
• рекомендуется воздержаться от курения за час до забора крови.

При сдаче мокроты для обследования также рекомендуется следовать некоторым правилам:

• материал собирают утром, поэтому предварительно чистят зубы и тщательно полоскают ротовую полость;
• если мокрота плохо отходит, то рекомендуется вечером принять отхаркивающее средство или сделать ингаляцию;
• необходимо прекратить приём антибиотиков за 15 дней до обследования.

Для получения достоверного результата анализа мочи, пациенту рекомендуется придерживаться следующих правил:

• материал необходимо собирать с утра;
• накануне не рекомендуется употреблять в пищу продукты, которые способны изменить цвет жидкости (свёклу, чернику и другие);
• прекратить приём антибиотиков за 15 дней до обследования.

Как проводится ПЦР на туберкулёз

Особенности забора материала:

1. Анализ крови обязательно берётся у пациента утром из вены в лаборатории.
2. Для сдачи мокроты на слизь нужна обязательно из гортани и желательно без большого количества слюны. Её пациент должен сплюнуть в специальный стерильный контейнер, после чего сдать на исследование.
3. Врачи берут соскоб специальным инструментом со слизистой щеки.
4. Моча сдаётся в специальном контейнере. Берётся средняя часть утренней порции.

Молекулярно генетическая реакция посредством ПЦР проводится с помощью специального прибора, который называется амплификатор. Для изучения необходимы сегменты ДНК, с которых начинается синтез молекул.

Методика состоит из четырёх этапов:

1. Изначально собирается необходимый биоматериал для исследования (кровь, мокрота и слюна).
2. Затем образец прогревается при температуре до 98 градусов и не более двух минут. Таким образом, разрушается первичная форма генетики ДНК и образуются две цепочки.
3. Далее идёт отжиг или понижение температуры, за счёт чего праймер связывается с нитью ДНК.
4. Последний этап носит название элонгация. Это синтез молекул, который приводит к конечному результату.

Необходимо провести 25–30 подобных циклов, чтобы получить определённое количество копий ДНК вирусов. По ним и определяются возбудители заболевания.

Информативность и достоверность ПЦР диагностики составляет 100%.

Расшифровка результатов обследования

Сроки изготовления анализа составляют порядка 5–6 часов.

Диагностика методом ПЦР даёт 2 варианта результатов:

1. Обнаружено. В материале, который исследовали, были выявлены ДНК туберкулёзного агента. Вероятность заражения составляет 97%. Таких пациентов быстро направляют в противотуберкулёзный диспансер, где и будет проводиться лечение.
2. Не обнаружено. Отрицательный ответ свидетельствует об отсутствии возбудителя заболевания.

При положительном результате врачом проводится развёрнутая расшифровка, которая определяет стадию и очаг болезни.

Фотогалерея

Анализ мокроты на туберкулёз Анализ крови на туберкулёз Анализ слюны на туберкулёз

Особенности ПЦР на туберкулёз у детей

ПЦР назначают, если сомнителен результат пробы Манту или при малейшем подозрении на заражение. Провежение процедуры безапасно для детей.

Сколько стоит ПЦР на туберкулёз?

Регион	Стоимость	Фирма
Москва	от 365 руб.	«ИНВИТРО»
Челябинск	от 140 руб.	«Областная клиническая больница №3»
Краснодар	от 350 руб.	«Солнечная»

Видео

Из видео узнаете что такое ПЦР и каким образом её проводят. Снято каналом СТС.

 Загрузка …

Источник: https://hromosoma.com/dnk/ptsr-na-tuberkulez-27227/

Пцр на туберкулез: диагностика, анализ крови, вместо манту ребенку, тест мочи, мокроты

В случае подозрения на заболевание лучше сразу сдать анализ ПЦР на туберкулез. Во время этого исследования берется кровь, которая проверяется под микроскопом. Полимерная цепная реакция все чаще стала заменять пробу Манту, чтобы выявить туберкулез.

Преимущества метода

Данный анализ уже через несколько часов определяет наличие возбудителя. Кроме того, если в организме будет присутствовать малое количество бактерий, данный метод все равно сможет их выявить.

Основным достоинством теста ПЦР являются следующие положительные моменты:

1. Болезнь выявляется в 100% случаев.
2. Специфичность ДНК МБТ высока.
3. Анализ выявляет возбудителя за 4-4,5 часа.
4. Успешно диагностируется туберкулез легких, с чем не могут справиться другие методы.
5. Возможность выявления определенного фрагмента, который содержится в данном возбудителе.

Полимерная цепная реакция дает возможность не только своевременно выявить возбудителя и начать лечение больного, она позволяет вовремя изолировать человека от общества в случае заражения. Палочка Коха — возбудитель туберкулеза — может находиться в организме где угодно. И лишь ПЦР анализ позволяет выявить ее в месте нахождения.

Исследование ПЦР также дает возможность подобрать лекарственный препарат в зависимости от чувствительности микроорганизмов.

Описание болезни

В ХIХ веке туберкулез называли чахоткой. Болезнь представляет собой инфекционное поражение внутренних органов, преимущественно легких. Туберкулез передается воздушно-капельным путем при чихании и кашле. Объектом заражения может быть как человек, так и животное.

После проникновения бактерий туберкулеза в организм болезнь длительное время может протекать в скрытой форме.

В зависимости от степени воздействия заболевшего человека на окружающих различают 2 формы заболевания:

1. Закрытая форма туберкулеза. Она не является опасной, т.к. человек не может заразить окружающих. Даже в анализах, в т.ч. и ПЦР, микобактерии заболевания не выявляются. Но все же опасность при данной форме присутствует, т.к. в любой момент закрытая форма может перейти в открытую. Такая активная форма туберкулеза может быть опасна не только для самого больного, но и для окружающих.
2. Открытая форма инфекции. При ней в биологических жидкостях человека выявляется палочка Коха. Больной туберкулезом на этой стадии несет особую угрозу для окружающих. Заразиться можно даже в том случае, если носитель тщательно следит за собой в плане гигиены.

К наиболее распространенным методам исследований, проводимых для выявления болезни, относятся:

1. Флюорография.
2. Томография грудной клетки или других пораженных мест.
3. Рентгенографическое исследование.
4. Исследование биологических материалов больного.
5. Туберкулиновая проба (Манту).

К наиболее эффективным способам выявить палочку Коха относится молекулярно-генетический анализ полимеразной цепной реакции — ПЦР диагностика туберкулеза.

Исследование на туберкулезную инфекцию

Полимеразная цепная реакция — это наиболее точный молекулярно-генетический анализ. Если произошло заражение туберкулезной инфекцией, полимерный тест исследования позволяет точно выявить ДНК или РНК возбудителя болезни. Для этого необходимо сдать кровь или другую биологическую жидкость.

Чтобы определить наличие туберкулеза, достаточно минимального количества бактерий, подойдет даже 1 клетка.

К другим преимуществам ПЦР диагностики относятся следующие:

1. При проведении данного анализа используется особый фермент, благодаря которому выявляется точное присутствие туберкулезной инфекции.
2. Анализ ПЦР особо чувствителен к микобактериям инфекции, поэтому точность диагностики приравнивается почти к 100%.
3. Уже через 3,5-5,5 часов после того, как тест проведен, можно будет узнать результаты анализов.

При таком заболевании, как туберкулез, очень важно выявить патологию на ранних ее стадиях. Поэтому тест на полимеразную цепную реакцию является наиболее информативным в этом случае. Когда бактерии только начинают атаковать, следует выявить их как можно раньше, пока их воздействие не затронуло жизненно важные функции внутренних органов.

Анализ ПЦР имеет еще 1 преимущество перед другими видами исследования: методика определяет чувствительность микроорганизмов к тому или иному лекарственному препарату, что позволяет терапии быть наиболее эффективной.

Подготовка к сдаче анализов на ПЦР

Если сдается слюна, то требуется подготовка к этому. За 12 часов перед процедурой необходимо отказаться от курения, алкоголя, приема лекарств и еды. Чистка зубов, полоскание рта различными освежителями и даже применение зубной нити запрещены. Также нельзя использовать губную помаду и жить половой жизнью. Следует ополаскивать ротовую полость кипяченой водой.

Не только туберкулез выявляется при помощи метода ПЦР. Тем же способом можно обнаружить и такие не менее серьезные недуги, как герпес, хламидии, мононуклеоз, пневмонию, бароллеоз, ВИЧ, гепатит, краснуху.

Чаще всего берется кровь из вены, но в некоторых случаях может понадобиться совершенно другой биологический материал:

1. Слюна.
2. Анализ мочи.
3. Соскоб из любой части тела.
4. Половые выделения.
5. Кал.
6. Спинномозговая жидкость.
7. Взятие мокроты из бронхов при отхаркивании.
8. Анализ слизи.

Но самым информативным методом ПЦР все-таки является анализ крови на туберкулез.

Сбор биоматериала

Несмотря на то что процедура выявления возбудителя по методу ПЦР занимает всего 4-4,5 часа, она относится к наиболее сложным видам диагностики. Многие факторы могут повлиять на точность результатов.

Например, собирать образцы на исследование необходимо по определенным правилам. Основным из них является повышенная стерильность при сборе биологического материала.

Поэтому данный анализ сложно проводить маленькому ребенку.

Если берется образец в качестве крови из вены, то специалист проводит анализ крови на ПЦР на туберкулез не только стерильным шприцем, но и по всем правилам соблюдения общей гигиены.

Кровь собирается в специальную пробирку и на протяжении всего исследования хранится в таких условиях, которые препятствуют ее свертываемости.

Если это анализ ПЦР мочи на туберкулез, то жидкость собирается рано утром, когда человек только проснулся. Перед походом в туалет больной принимает душ и после этого берет стерильную емкость для сбора урины.

В случае взятия соскоба с половых органов, как у женщин, так и у мужчин, вся процедура проводится в условиях медицинского учреждения.

Существуют и более сложные анализы, например взятие жидкости из спинного мозга. В этом случае все действия проводятся в условиях стационара опытными врачами.

Чаще всего прохождение анализа полимерной цепной реакции назначается в таких случаях:

1. Чтобы диагностировать болезнь в легочной ткани.
2. Чтобы выявить источник заболевания.
3. Чтобы определить болезнь за пределами легких.
4. С целью диагностики рецидивов болезни.

Последовательность выполнения теста

Диагностика туберкулеза у детей и взрослых при помощи полимерной цепной реакции проходит следующие этапы:

1. В определенных ситуациях берется различный материал на исследование. Это может быть кровь, мокрота или промывная жидкость из бронхов.
2. После этого взятый биологический материал в течение определенного времени (чаще всего это несколько минут) подвергают воздействию высоких температур (до +97°С). В результате разрушается первоначальная структура ДНК микроорганизма, которая состоит из 2 цепей.
3. После этого температура начинает снижаться, это действие называется отжигом. В это время праймер соединяется с 1 из разъединенных цепей.
4. В завершение проводится элонгация. Во время нее происходит необходимый биологический синтез существующих молекул.

Понадобится 25-30 циклов, чтобы получилось необходимое количество копий ДНК на микобактерии туберкулеза.

Для процедуры необходимо дорогостоящее оборудование, поэтому не во всех медицинских учреждениях имеется возможность проводить тест ПЦР на туберкулез вместо Манту.

Благодаря прививкам и исследованию ПЦР (вместо Манту) можно предотвратить развитие такого опасного недуга, как туберкулез. Теперь не понадобится дожидаться начала проявления болезни или делать снимки на рентгеновском аппарате.

Если появляются подозрения на инфицирование, для исключения страшных последствий болезни всегда можно сделать тест ПЦР, который с максимальной точностью определяет состояние организма.

В условиях реального времени такие формы диагностики, как проба Манту и флюорография, постепенно отходят на второй план по сравнению с методом ПЦР.

Источник: https://Tuberkulez.pro/analizy/ptsr.html

Пцр на туберкулез: диагностика, сколько стоит анализ крови, мочи, мокроты, тест на микобактерии у детей, вместо манту ребенку

Одним их эффективных диагностических методов является метод ПЦР на туберкулез (полимеразная цепная реакция). Анализ представляет собой метод обнаружения возбудителя при помощи ДНК и РНК в организме человека.

Анализ высокочастотный, поэтому позволяет выявить микроорганизмы, которые являются возбудителями болезни, даже если они находятся в малом количестве. Для этого достаточно наличия единичного клеточного элемента.

Анализ проводится при помощи полимеразы, специфического фермента.

В каких случаях необходим пцр

Туберкулез – распространенное заболевание инфекционного происхождения, возбудитель которого – палочка Коха. К основным симптомам патологии относится кашель с выделением мокроты в течение длительного периода, кровохарканье, которое присоединяется на более поздних стадиях болезни, повышенная температура тела, постоянная слабость, потливость в ночное время, резкое похудение.

Туберкулез может поражать не только легкие, но и головной мозг, систему пищеварения, суставы, позвоночник, кожные покровы, мочеполовую систему. Болеют как взрослые, так и дети. Каждый год заболевают около 10 млн человек, из которых около 2 млн погибают. Патология передается воздушно-капельным путем, через органы пищеварения, быстро образует устойчивость ко многим медикаментозным средствам.

Важным моментом в лечении инфекции является вовремя обнаруженная болезнь.

Метод ПЦР для выявления туберкулеза полностью безопасный и применяется без ограничений. Проводится по направлению от фтизиатра, педиатра, терапевта или пульмонолога. В некоторых ситуациях ПЦР является единственным диагностическим методом, часто назначается:

• при беременности, т.к. во время вынашивания ребенка рентгенологическое и флюорографическое исследования противопоказаны;
• при контакте с источником инфекции;
• при аллергической реакции;
• при ВИЧ-инфекции;
• при затрудненной постановке диагноза в случае болезней легких;
• при обследовании перед проведением оперативных вмешательств;
• в детском возрасте.

Другие методы также продолжают применяться в случаях, когда нет возможности провести ПЦР, – это туберкулинодиагностика или Манту, флюорографическое исследование, рентгенография легких. Данные обследования бесплатные, в отличие от ПЦР, но имеют свои недостатки.

ПЦР диагностика туберкулеза у детей – менее вредная процедура, чем рентген, при котором ребенок получит лишнюю и не нужную дозу облучения. Тест на туберкулез может вызвать проявление аллергической реакции у ребенка. Бактериологический анализ долго исследуется, результата можно ждать только через месяц. Поэтому при возможности проведения ПЦР ребенку лучше использовать его.

Противопоказания к методу

Противопоказаний для данного вида диагностики практически нет, можно использовать при простудных и других заболеваниях. Не рекомендуется проводить исследование сразу после прививки и курса противотуберкулезной терапии, т.к. остаточные микроорганизмы могут находиться некоторое время в крови и влияют на диагностику туберкулеза.

Преимущества и недостатки анализа

Диагностика туберкулеза данным методом – распространенная процедура, она имеет ряд преимуществ:

• Высокая точность исследования, позволяющая высеять микобактерии в малых количествах.
• Выявляет заболевание на самых ранних стадиях, еще до возникновения симптоматики.
• С помощью этого метода получается с первого раза выявить возбудителя.
• Все исследование (с получением результата) занимает не более 5 часов. При этом посев необходимо ждать несколько недель. Это особенно важно перед проведением оперативных вмешательств, в случае необходимости быстрой диагностики на наличие заболевания.
• Метод эффективен при диагностике рецидива заболевания.
• Для исследования применяется жидкий биологический материал.
• Для проведения диагностики туберкулеза в легких более достоверную диагностическую информацию дает мокрота, при менингите туберкулезного происхождения исследуются участки спинного мозга.
• Кровь помогает обнаружить местный очаг инфицирования, проверить степень чувствительности возбудителя к антибактериальной терапии, а при помощи этого назначается эффективное и правильное лечение.
• Может использоваться вместо флюорографического и рентгенологического исследований, которые запрещены для проведения детям младшего возраста. При необходимости можно назначать исследование ПЦР на туберкулез вместо Манту.

Недостатки:

• Главный – это достаточно высокая цена, поскольку для проведения исследования применяется дорогое современное оборудование. За счет этого в основном используется как метод дополнительной диагностики наряду с другими исследованиями.
• Невозможность провести ПЦР сразу после курса лечения из за остаточных бактерий.
• В некоторых случаях в результате мутирования бактерий – возбудителей заболевания – результат анализа может быть ложноположительным.

Виды анализа

Выбор того или иного биологического материала на исследование туберкулеза назначается индивидуально, это может быть кровь, мазок слюны, мокрота, моча.

Кровь

Анализ крови на туберкулез назначают в случае невозможности проведения других исследований.

Кроме того, он более безвреден для тех людей, которым рентгенографическое обследование способно принести вред.

Для того чтобы увидеть полную картину, иногда требуется сделать несколько снимков, а это лишнее облучение организма. Кровь может исследоваться и при получении сомнительных результатов флюорографии.

Слюна

Анализ ПЦР на туберкулез слюны не такой информативный, как исследование крови, потому что туберкулезная инфекция не действует на слюнные железы. В результате ответ почти всегда отрицательный.

Туберкулез — не приговор! Наша постоянная читательница порекомендовала действенный метод! Новое открытие! Ученые выявили лучшее средство, которое моментально избавит вас от туберкулеза. 5 лет исследований!!! Самостоятельное лечение в домашних условиях! Тщательно ознакомившись с ним, мы решили предложить его и вашему вниманию. Читать далее >>

Тем не менее ПЦР-тест слюны может выявить легочные и внелегочные формы протекания заболевания. В случае если при воздействии реагента цветовая гамма исследуемого образца не поменялась, микобактерии туберкулеза не обнаружены. При сомнительном результате проводится ряд дополнительных обследований.

Мокрота

Анализ мокроты на туберкулез берется на исследование 3 раза во избежание неточного результата. При начальной стадии инфицирования мокрота будет выделяться в малом количестве, при запущенной патологии будут присутствовать кровянистые включения.

При подозрении на туберкулез костей или нервной системы данное исследование информативным не будет.

Моча

Анализ мочи помогает выявить туберкулез внелегочной формы – мочеполовых органов. При поражении легких данное исследование не информативно.

Сдача ПЦР мочи на туберкулез требует подготовки. Накануне процедуры нужно исключить прием лекарственных препаратов, сексуальные контакты. Брать материал следует в утренние часы, стараться за несколько дней до проведения процедуры не употреблять в пищу продукты, которые могут окрасить мочу в различные цвета.

Подготовка к процедуре

Во избежание получения ложного или не информативного результата рекомендовано придерживаться следующих правил:

• Перед ПЦР-анализом на туберкулез в течение 8 часов воздержаться от приема пищи.
• Не употреблять алкоголь и не курить в течение 6 часов перед процедурой.
• Перед исследованием не принимать лекарственные препараты.
• Мокроту собирать утром после чистки зубов и полоскания ротовой полости кипяченой водой.
• При небольшом количестве выделяемого экссудата накануне выпить препарат с отхаркивающим действием или провести ингаляцию. Наиболее информативная мокрота та, в которой присутствуют слизь, гной с белыми или желтоватыми вкраплениями.

При невозможности взятия мокроты на исследование применяют смыв из области бронхов, он не требует специальной подготовки. Проводится путем вливания пациенту в трахею раствора натрия хлорида, который провоцирует кашель с жидкостью. Она и используется для дальнейшего исследования.

Повлиять на точность результата могут некоторые лекарственные препараты, особенно антибиотики и гепарин. По этой причине за 3 дня до проведения процедуры следует исключить их применение.

Как производится забор крови

Процедура проходит с использованием амплификатора, исследование состоит из 4 этапов. Для анализа берутся участки ДНК, в которых начинается процесс синтезирования молекул, нуклеотидов, полимеразанов. Образцы прогреваются до температуры 98°С для того, чтобы разрушилась первичная структура ДНК-цепочки.

Затем праймер связывается с нитью ДНК при помощи отжига и снижения температуры на несколько градусов.

После 25-30 идентичных циклов образуется некоторое число копий ДНК вирусов, по которым уже и определяется возбудитель болезни. Этот анализ может заменять Манту ребенку. Результат исследования может быть положительным в течение некоторого времени, т. к. анализ ПЦР не идентифицирует мертвые микобактерии от живых.

Расшифровка результатов

Срок проведения исследования на ПЦР при туберкулезе составляет 6-7 часов. Может быть 2 варианта ответа:

• Обнаружено – в исследуемом материале нашли ДНК микобактерии туберкулеза. Возможность заражения – примерно 98%. При таком результате доктором проводится развернутая расшифровка анализа, которая определяет стадию протекания заболевания и ее очаговое расположение. Таких пациентов немедленно отправляют в противотуберкулезный диспансер для проведения лечения.
• Не обнаружено – возбудитель заболевания отсутствует.

Сколько стоит анализ

Анализ крови ПЦР на туберкулез стоит от 240 до 365 руб., цена зависит от города. Самый дорогостоящий анализ в Москве, в остальных регионах цена на исследование примерно одинаковая.

Источник: https://ProTuberkulez.info/diagnostika/ptsr.html